Shen, S. C., Chen, Y. C., Hsu, F. L., & Lee, W. R. (2003). Differential apoptosis‐inducing effect of quercetin and its glycosides in human promyeloleukemic HL‐60 cells by alternative activation of the caspase 3 cascade. Journal of cellular biochemistry, 89(5), 1044-1055.
FONDO: En nuestros estudios anteriores se demostró que los flavonoides poseen varios efectos biológicos, entre ellos actividades antitumorales, antioxidantes y antiinflamatorias. Sin embargo, el efecto de la glicosilación en sus funciones biológicas aún no está definido.
OBJETIVO: En el presente estudio se estudiaron las actividades inductoras de apoptosis de tres flavonoides relacionados con la estructura, entre ellos la quercetina de aglycone (QUE), la rutina de glicona (RUT; QUE-3-O-rutinoside) y la quercitrina de glicona (QUI; QUE-3-O-rhamnoside). Tanto el RUT como el QUI son glicósidos QUE, y poseen rutinosa y ramnosa en la posición C3 de QUE, respectivamente.
MÉTODOS / RESULTADOS: Los resultados del ensayo MTT mostraron que QUE, pero no RUT y QUI, exhibe un efecto citotóxico significativo en las células HL-60, acompañado de la aparición, dependiente de la dosis y el tiempo, de características de apoptosis que incluyen un aumento en la intensidad de la escalera de ADN, cambios morfológicos, cuerpos apoptóticos y un aumento de las células hipodiploides por análisis de citometría de flujo. QUE, pero no RUT o QUI, causó la inducción rápida y transitoria de la actividad de la caspasa 3/CPP32, pero no la actividad de la caspasa 1, de acuerdo con la división de los sustratos de la caspasa 3 de la polimerasa (PARP) y las proteínas D4-GDI, y la aparición de fragmentos de caspasa 3 divididos que se detectaron en las células HL-60 tratadas con QUE, pero no con RUT o QUI. Se detectó una disminución de la proteína anti-apoptótica, Mcl-1, en las células HL-60 tratadas con QUE, mientras que otras proteínas de la familia Bcl-2, incluyendo Bax, Bcl-2, Bcl-XL y Bag permanecieron sin cambios. El inhibidor de caspasa 3, Ac-DEVD-FMK, pero no el inhibidor de caspasa 1, Ac-YVAD-FMK, atenuó la muerte celular inducida por el QUE. Los resultados del ensayo DCHF-DA indican que no se encontró un aumento significativo en el nivel de peróxido intracelular en las células tratadas con QUÉ, y que el QUÉ inhibía el nivel de peróxido intracelular inducido por el H(2)O(2). Los depuradores de radicales libres N-acetilcisteína (NAC) y la catalasa no mostraron ninguna prevención de la apoptosis inducida por el QUE. Además, la QUE no indujo apoptosis en una línea celular monocítica madura THP-1, caracterizada por la falta de escalas de ADN, la activación de la caspasa 3, la división PARP y una disminución de Mcl-1, en comparación con las células HL-60.
CONCLUSIONES: Nuestros experimentos proporcionan pruebas que indican que la adición de rutinosa o ramnosa atenúa la actividad inductora de apoptosis de la QUE, y que está implicada la cascada de caspasa 3 pero no la producción de radicales libres.