Lee, L. T., Huang, Y. T., Hwang, J. J., Lee, P. P., Ke, F. C., Nair, M. P., … & Lee, M. T. (2002). Blockade of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase activity by quercetin and luteolin leads to growth inhibition and apoptosis of pancreatic tumor cells. Anticancer research, 22(3), 1615-1627.
OBJETIVO: Para conocer el mecanismo de su acción, evaluamos los efectos de dos flavonoides, quercetina (Qu) y luteolina (Lu), en la actividad de la tirosina cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) de las células cancerosas MiaPaCa-2.
MÉTODO: La exposición de estas células que expresan el EGFR a 20 microM Qu o Lu dio lugar a disminuciones concomitantes en la fosforilación y el crecimiento de la proteína celular. A nivel celular, la sensibilidad de Qu y Lu se correlacionó con los niveles de EGFR y la rápida proliferación celular, lo que indica la posibilidad de dirigirse a las células más propensas a la progresión neoplásica.
RESULTADOS: El tratamiento celular con los flavonoides disminuyó notablemente el alcance de la fosforilación de las proteínas celulares, al modular eficazmente las actividades de la proteína tirosina quinasa (PTK), incluida la del EGFR. El ensayo de la cinasa del inmunocomplejo reveló que tanto el Qu como el Lu inhibían las actividades de la PTK responsables de la autofosforilación del EGFR, así como de la transfosforilación de la enolasa. El tratamiento de las células con Qu o Lu también redujo los niveles de fosfotirosilo de las proteínas 170-, 125-, 110-, 65-, 60-, 44-, 30- y 25-kDa. Identificamos la fosfotirosilproteína de 170-kDa como EGFR. Qu y Lu mostraron una acción específica en la obstaculización de los niveles de fosforilación de esta y las proteínas mencionadas, mientras que no tienen un efecto discernible en su síntesis. Se demostró una atenuación dependiente del tiempo de la fosforilación de las proteínas mencionadas. El tratamiento de las células con Qu o Lu durante 6 horas mostró poca inhibición, pero la prolongación del tratamiento celular durante 24 horas causó la supresión de la fosforilación. La continuación del tratamiento celular culminó con la inducción de la apoptosis, que se caracterizó por la contracción de la morfología celular, la fragmentación del ADN y la degradación de la poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP). El inicio de la apoptosis y los acontecimientos asociados se produjeron de manera dependiente del tiempo. Los datos demuestran claramente que las células MiaPaCa-2 responden a Qu y Lu mediante una reducción paralela de la fosforilación de la proteína celular y la proliferación celular. La atenuación de la fosforilación del EFGR y de otras proteínas evocada por el flavonoide parecía ser transitoria, ya que la eliminación del flavonoide del medio de crecimiento celular después de 24 horas de incubación seguida de la exposición a 10 nm de EGF, restauró la fosforilación de la proteína y la proliferación celular. Tal adición de EGF también fue capaz de revertir la inhibición del crecimiento celular inducida por Qu o Lu y disminuir la digestión nuclear evocada por 20 microM Qu o Lu. Tanto Qu como Lu fueron capaces de revertir el efecto del EGF tanto bioquímica como funcionalmente. Basándose en la evidencia acumulada, las proteínas mencionadas podrían estar implicadas en la transducción de la señal de crecimiento y los sutiles cambios en su fosforilación, tal y como se efectúa por los flavonoides, utilizados como una guía fiable para predecir la respuesta de crecimiento. El efecto antiproliferativo de los flavonoides podría resultar, al menos en parte, de la modulación de la vía de señalización mediada por el EGF.
CONCLUSIONES: Los resultados indican que el bloqueo de la vía de señalización del EGFR por los inhibidores de la PTK Qu y Lu inhibe significativamente el crecimiento de las células MiaPaCa-2 e induce la apoptosis. La modulación de la cinasa EGFR parece ser un componente intrínseco de importancia crítica de la supresión del crecimiento inducida por Qu y Lu, aunque otros mecanismos también podrían haber contribuido al efecto neto.